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基因编辑技术对比 | ZFNs | TALENs | CRISPR/Cas9 |
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靶点DNA序列识别区域 | 锌指(ZF)结构域 | 重复可变双残基(RVD)的重复 | CRISPR RNA(crRNA)或向导RNA(gRNA) |
DNA剪切 | FokⅠ核酸酶结构域 | FokⅠ核酸酶结构域 | Cas9蛋白 |
典型核酸酶构建 | 通过搜索各类ZF组合数据库,拼接3-4个ZF结构 | 8-31个重复可变双残基的拼接 | gRNA的寡核苷酸合成和分子克隆(或RNA合成) |
所识别靶点大小 | (9-12bp)*2 | (8-31bp)*2 | 20bp+NGG*1 |
最小模块识别碱基数量 | 3 | 1 | 1 |
优点 | 平台成熟、效率高于被动同源重组 | 设计较ZFN简单,特异性高 | 靶向精确、脱靶率低、细胞毒性低、可实现多基因编辑 |
缺点 | 设计依赖上下游序列、脱靶率高、具有细胞毒性 | 细胞毒性、模块组装过程繁琐、需要大量测序工作、成本高昂 | 靶区前无PAM则不能切割、特异性低、NHEJ会产生随机毒性 |
基因修饰率 | - | 0-34% | 51-79% |
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